邻苯二甲酰亚胺保护的3'胺试剂可提高偶联产物的收率

最常用于修饰寡核苷酸3'末端的试剂是可通过多个分销商获得的3'氨基修饰剂C-7（图1）。它基于具有两个羟基的支链烷基胺，一个用于连接至固体载体，另一个用于与核苷亚磷酰胺偶联。不幸的是，它有一个严重的缺点。保护伯胺的氟甲氧基甲氧羰基（FMOC）基团不稳定，使得该胺在DNA合成循环的加帽步骤中易受不可逆的乙酰化作用。

几年前发表了一种有趣的替代方法，即使用碱不稳定的邻苯二甲酰亚胺将胺置于与固相载体的实际连接中（图2）（Petrie 等， 1992）。然而，在最初的报告之后，这种创新的试剂再也没有在文献中出现。

一直在寻找制造更高质量的修饰寡核苷酸的新方法，我们合成了邻苯二甲酰亚胺保护的氨基载体并将其与3'氨基修饰剂C-7载体进行比较。TriLink的有机化学小组根据报道的方法对Phthalimidyl-3'-Amino-CPG进行了合成，并稍加改动。3'氨基修饰剂C-7 CPG和邻苯二甲酰3'-氨基CPG可从弗吉尼亚州Sterling的Glen Research获得。

将两种类型的3'氨基标记支持物（每种1μmol）装入合成柱和20mer磷酸二酯寡核苷酸5'-GTC-ATC-TGA-TAG-CAC-GTC-GA-（Linker）-NH 2 -3使用Expedite 8909和标准条件制备。每种支持物合成三列。通过在4ml加盖的小瓶中用1.5ml新鲜的浓氢氧化铵水溶液在55℃下过夜处理来使寡核苷酸脱保护。脱保护后，将寡核苷酸倒出，漂洗珠子，并将合并的溶液干燥。用乙醇沉淀样品，将六个样品中每个样品的30 OD 260等分试样放入单独的1.5 mL微管中，干燥以制备结合物。

在相同条件下，将每个样品与DABCYL琥珀酰亚胺酯共轭共6小时。然后使混合物通过10mL G-25柱，

使用dH 2 O作为洗脱剂以去除过量的染料。通过反相（RP）HPLC分析缀合的寡核苷酸。

结合的结果示于下表1中。图3和图4中所示的HPLC色谱图是该组的典型色谱图，清楚地说明了两种载体之间产品质量的差异。